新生SD大鼠成肌细胞体外培养的实验研究

摘要

目的:了解新生SD大鼠成肌细胞在体外培养条件下的生物学特性.方法:新生3 d内SD大鼠幼崽,切取骨骼肌标本.应用Blau法经胰蛋白酶与胶原酶多步消化、分离成肌细胞.差速贴壁法纯化后,在ψ=20%的胎牛血清生长培养基中培养,绘制生长曲线评价其增殖情况,ψ=5%的胎牛血清融合培养基培养,计算成肌细胞融合率评价其分化能力.通过光镜、免疫组织化学方法鉴定所得细胞.结果:培养后成肌细胞免疫组织化学染色强阳性,能融合形成肌小管,证明为骨骼肌成肌细胞.在生长培养基中原代细胞倍增时间为5d,在融合培养基中肌小管融合率较高.结论:多步酶消化法与差速贴壁法能获得足量、纯净的成肌细胞,所得细胞增殖力强,能表达骨骼肌特异收缩蛋白,融合培养基能促进其体外分化.