远缘链球菌中葡萄糖基转移酶催化活性区基因的克隆和初步表达

摘要

目的:构建一株高效表达Streptococcus sobrinus 6715 中GTF-Ⅰ催化活性区(含有B细胞表位)多肽的菌株,为抗GTF-Ⅰ的单克隆抗体的检测和防治龋病亚单位疫苗的研究奠定基础.方法:提取基因组DNA,然后用PCR技术扩增出中目的肽段的约1.1 kb编码基因,并将其克隆至表达载体pGEX-4T-1中构建pGEX-gtf表达质粒.该质粒转化大肠杆菌JMl09后获得重组表达菌株.PCR筛选阳性克隆子.异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导,确定含有pGEX-gtf的大肠杆菌JMl09的表达情况.结果:含有质粒pGEX-gtf的大肠杆菌JM109能够表达GST-GTF融合蛋白.结论:成功扩增目的基因,并且把它定向克隆到表达载体pGEX-4T-1中构建表达质粒,并且该表达质粒能在大肠杆菌中进行表达.