变形链球菌葡糖基转移酶催化活性区基因的分子克隆，表达及活性测定

摘要

龋病是人类最为常见的一种口腔疾病，它的发生与变形链球菌的作用密切相关。变形链球菌能够通过胞外多糖结合在牙齿的表面，产酸并导致牙齿表面脱矿产生龋齿。 葡糖基转移酶(Glucosylliransferase，GTF)是变形链球菌合成的重要致龋因子，催化蔗糖合成包括葡聚糖在内的多种胞外多糖。由它催化合成胞外葡聚糖的过程对变形链球菌在牙面形成菌斑及此后龋病的发生至关重要。GTF存在于变形链球菌菌体表面、牙面和唾液中。GTF包含催化活性区(catalytic，CAT)和葡聚糖结合区(Glucan binding，GB或GLU)两个功能区段，催化活性区具有催化蔗糖水解的活性，能够催化蔗糖产生葡聚糖；葡聚糖结合区与葡聚糖结合，这种结合是特异性，不可逆的，且结合力非常强，由此介导了变形链球菌之间、菌体与葡聚糖、菌体与牙面之间的相互作用，从而使变形链球菌粘附、聚集在牙齿的表面并产酸，酸引起牙齿表面脱矿，最终导致龋病的发生。因此，抑制GTF催化合成葡聚糖就有可能预防龋病的发生。 GTF催化活性区是它的重要功能区段，本研究的目的是通过基因工程重组表达的方法获得具有良好生物学活性的可溶性GTF催化活性区，为研究GTF的生物学功能以及龋病发生机制做准备。 在实验中，选用了变形链球菌GS5菌株钓取CAT基因(CAT-C)，连入实验室本身保存的表达载体pET-28a-SWG中进行表达获得不溶性目的蛋白(rCAT-C)，并由此制备出抗rCAT-C抗体，抗体能够特异识别变形链球菌GS5表达的天然GTF。为了获得可溶性的CAT区，我们又将CAT克隆至载体pET-32-NusA中，成功获得可溶性的目的蛋白(rNusA-cAT-C)。初步活性测定实验结果表明rNusA-CALT-C具有良好的催化活性。该结果的取得为今后GTF功能抑制剂的获得以及龋病防治的相关研究打下基础。

目录

论文说明：缩略词表

声明

前言

第一部分gtfC基因催化活性区（CAT-C）的钓取，表达及抗体制备

实验材料及仪器

实验步骤

实验方法

实验结果

实验小结及讨论

第二部分重组GTF（rCAT-C）的可溶性表达及活性测定

实验材料及仪器

实验步骤

实验方法

实验结果

实验小结及讨论

全文总结

文献回顾

参考文献

致谢

个人简历