含人雌激素受体β基因启动子荧光素酶报告基因载体的构建及脂氧素对其转录活性的调节

摘要

目的:构建含人雌激素受体β(ERβ)基因启动子的荧光素酶报告基因载体,并探究阿司匹林诱生的脂氧素(LXA4)对其转录活性的影响.方法:以子宫内膜间质细胞基因组DNA为模板,应用PCR技术扩增ERβ启动子序列,插入荧光素酶报告基因载体pGL3-basic中,构建pGL3-basic-ERβ报告基因载体,行双酶切及测序鉴定后将上述载体与pCMX-βgal载体共转染293T细胞24小时后,加入不同浓度(0.1、1、10、100 nmoL/L)的LXA4刺激24小时,然后裂解细胞检测荧光素酶的活性.结果:测序结果表明,构建的pGL3-basic-ERβ荧光素酶报告基因载体序列正确;在293T细胞中,构建的pGL3-basic-ERβ报告基因载体与空载体pGL3-basic相比,pGL3-basic-ERβ报告基因载体的转录活性提高了将近十倍;荧光素酶报告系统表明,LXA4浓度为0.1、1、10、100 nmol/L时其相对荧光强度与对照组比较明显升高(P＜0.05),10 nmol/L浓度的相对荧光强度明显高于其他浓度(P＜0.05).结论:成功构建了pGL3-basic-ERβ荧光素酶报告基因载体,并证明在一定浓度LXA4的刺激下ERβ启动子区域转录活性升高,LXA4浓度为10 nmol/L时转录活性达最高值.