非小细胞肺癌劳拉替尼获得性耐药细胞株的建立及耐药后治疗策略

摘要

目的 建立人非小细胞肺癌(NSCLC)劳拉替尼获得性耐药细胞株,探索其耐药机制及耐药后治疗策略.方法 采用逐步递增劳拉替尼剂量对克唑替尼原发性耐药的NSCLC细胞SNU-2535进行处理,建立劳拉替尼耐药细胞SNU-2535 LR;采用CCK-8法检测SNU-2535 LR对劳拉替尼的耐药性及APR-246对耐药的逆转作用和对化疗药物的敏感性变化;二代测序(NGS)检测ALK及其它相关基因突变.结果 与SNU-2535比较,SNU-2535 LR对劳拉替尼敏感性明显下降(P<0.05),耐药指数为34.092,提示成功建立劳拉替尼耐药细胞.NGS检测出SNU-2535 LR EML4-ALK丰度显著降低,克唑替尼耐药突变ALK p.G1269A消失,出现TP53突变,丰度接近100％.联用P53蛋白激动剂APR-246能逆转SNU-2535 LR对劳拉替尼耐药,逆转倍数为4.768.SNU-2535 LR对吉西他滨、多西他赛、紫杉醇敏感性均优于顺铂和培美曲塞(P<0.05),对吉西他滨、多西他赛、紫杉醇的敏感性均明显高于亲本细胞(P<0.05).结论 SNU-2535 LR为首次建立的劳拉替尼获得性耐药细胞,EML4-ALK融合基因丰度下降及TP53突变可能是其耐药机制之一.P53蛋白激动剂联合劳拉替尼可以逆转SNU-2535 LR对劳拉替尼的耐药.劳拉替尼耐药细胞株对吉西他滨、多西他赛、紫杉醇敏感性均优于顺铂和培美曲塞.