非小细胞肺癌HCC827奥希替尼耐药细胞株的建立及耐药机制探讨

摘要

目的 体外构建人非小细胞肺癌(NSCLC)奥希替尼耐药细胞株HCC827OR,并探讨耐药机制.方法 使用NSCLC细胞株HCC827,通过浓度递增法构建奥希替尼耐药细胞株HCC827OR,并比较两种细胞株形态学、增殖能力、细胞凋亡以及细胞蛋白质表达的差异.结果 半抑制浓度(IC50)及耐药指数(RI)结果显示,HCC827OR对奥希替尼高度耐受,且HCC827OR与HCC827细胞形态差异明显.CCK8增殖实验第1天,HCC827OR的细胞活性高于HCC827(P<0.05),第2、3、4天,HCC827OR的细胞活性显著高于HCC827(P<0.01).克隆形成实验结果显示,HCC827OR集落形成数高于HCC827(P<0.01).EdU染色后,HCC827OR的EdU阳性细胞数高于HCC827(P<0.01).凋亡实验结果显示,与HCC827比较,HCC827OR细胞凋亡减少(P<0.01).Western blot实验结果显示,相较于HCC827,HCC827OR细胞的EGFR和p-EGFR的表达下降,p-AKT、p-ERK和Vimentin的表达上升.结论 成功构建NSCLC奥希替尼耐药细胞株HCC827OR,推测耐药机制与EGFR、p-EGFR表达减少,p-AKT、p-ERK和Vimentin表达增加有关.