丙型肝炎5'非编码区末端快速基因扩增方法的建立及应用

摘要

目的建立快速获得丙型肝炎(HCV)基因组5'非编码区(5'UTR)真末端序列的分子生物学方法.方法逆转录后利用末端聚合酶(TDT)进行加尾反应,再利用套式聚合酶链反应(PCR)扩增出目的末端基因的cDNA片段,A-T克隆,用限制性内切酶片段长度多态性分析(RFLP)与PCR鉴定重组子,全自动序列分析仪测定插入子序列.结果 cDNA末端快速扩增技术(RACE)获得5株HCV5'UTR克隆,包括3株全长克隆和2株缺失克隆.2株缺失克隆,一条在5'末端缺失53个碱基,另一条缺失144个碱基.结论 RACE技术快速、有效、实用,可有效获得丙型肝炎病毒基因组的5'非编码区末端序列.