小鼠金属硫蛋白基因－I在CHO细胞中稳定表达及其在医疗方面的应用

摘要

将小鼠的ＭＴ－Ⅰ基因插入ｐＳＶ２－ｄｈｆｒ质粒的ＥｃｏＲＩ位点，构建了具有ＳＶ４０和ＭＴ双启动子并正向插入ＭＴ－Ⅰ基因的表达载体。用改良的磷酸钙／ＤＮＡ沉淀法将表达载体导入ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞内，用不含次黄嘌呤（Ｈ）和胸腺嘧啶（Ｔ）的选择培养基筛选出稳定表达ＭＴ阳性克隆Ｄ－２２，经检测１０６细胞的ＭＴ表达量约为１．８μｇ，Ｄ－２２细胞对Ｃｄ２＋浓度抗性较之ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞高１４倍。为了研究金属硫蛋白对正常细胞所具有的保护作用，将不同浓度的顺铂分别处理无ＭＴ表达的ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞和有ＭＴ表达的Ｄ－２２细胞。实验发现顺铂对Ｄ－２２细胞和ＣＨＯ－ｄｈｆｒ－细胞５０％生长抑制浓度（ＩＣ５０）分别是０．１４５μｍｏｌ／Ｌ和０．０４μｍｏｌ／Ｌ。上述研究表明ＭＴ对正常细胞有一定的保护作用，因而通过诱导正常细胞提高ＭＴ的表达量，同时使用ＭＴ阻断剂阻断肿瘤组织的ＭＴ合成。