嘌呤霉素致足细胞损伤细胞模型的建立

摘要

目的:建立小鼠足细胞损伤的细胞模型,为进一步从细胞、分子水平研究足细胞的生物学作用,以及足细胞特别是裂孔隔膜(slit diaphragm)分子在蛋白尿发生、发展中的分子机制提供稳定、可靠的足细胞损伤模型。方法:应用不同浓度的嘌呤霉素(15mg/L、45mg/L和75mg/L)作用于足细胞,通过流式细胞仪检测作用24h和48h后足细胞的凋亡情况,以确定嘌呤霉素的作用浓度和时间,建立足细胞损伤的细胞模型;并以噻唑蓝(MTT)检测足细胞损伤后的活力,应用免疫荧光染色观察裂孔隔膜关键分子Nephrin、Podocin以及骨架蛋白F-actin在足细胞损伤中的分布来评价足细胞损伤。结果:45mg/L嘌呤霉素作用48h以及75mg/L嘌呤霉素作用24h或48h,足细胞明显凋亡。结论:嘌呤霉素可以呈时间和剂量依赖性诱导小鼠足细胞凋亡,45mg/L嘌呤霉素作用48h后诱导的足细胞损伤模型稳定、可靠,可应用于足细胞损伤的研究。