山羊β-酪蛋白基因调控区的克隆及启动子活性的检测

摘要

为了克隆山羊β-酪蛋白基因的调控区并检测5'调控区的启动子活性,利用Long PCR技术对西农莎能奶山羊β-酪蛋白基因(CSN2)5'和3'调控区进行了克隆(5'调控区分两段进行克隆,3'调控区进行直接克隆)、测序,将克隆的5'调控区的两个片段通过共有的单一性酶切位点HindⅢ融合成一个长为6.7 kb的片段,用其替代表达载体pEGFP-C1上原来的启动子CMV,指导报告基因绿色荧光蛋白(GFP)在山羊乳腺上皮细胞中的瞬时表达.结果表明,克隆的GC 3.3、GC 4.3、GC 6.6 3个片段与GenBank中登录的山羊CSN2基因相应序列相比,同源性均为99%,其包含了TATA box、GC island、CAAT box、SAR、APl、Oct-1、Sm、Glyco、Pu-1、CAC等复合元件和转录翻译调节因子的作用位点,并且5'调控区可以有效指导报告基因的表达,从而初步验证了所克隆的山羊CSN2基因5'调控区的有效性,表明克隆的调控区可用于乳腺生物反应器的研究.