抗Zhangfei蛋白单克隆抗体的制备

摘要

[目的]制备抗Zhangfei蛋白的单克隆抗体,并鉴定其特性.[方法]用Zhangfei融合蛋白免疫Balb/c小鼠,取免疫小鼠脾细胞与SP2/0融合,筛选出阳性克隆,应用有限稀释法筛选抗Zhangfei蛋白的单克隆杂交瘤株；采用腹水诱生法制备单抗腹水,用饱和硫酸铵法纯化腹水抗体；采用间接ELISA、单克隆抗体亚型检测试剂盒、免疫印记技术、曲线拟合方案等分别鉴定单抗效价、亚型、特异性和亲和力等特性.[结果]免疫小鼠的血清抗体效价达1∶5 000以上,细胞融合克隆率为98.96％,阳性克隆率为30.18％,筛选出2株抗Zhangfei蛋白的单克隆杂交瘤细胞,其培养上清效价均达到1∶800,腹水单抗效价分别为1∶10 5和1∶2×105,亲和常数分别为2.5×106和2.3×10 6.制备的抗Zhangfei蛋白单克隆抗体的亚型均为IgG1类型.[结论]制备的抗Zhangfei蛋白单克隆抗体具有较高的效价和较强的亲和力,可用于进一步研究Zhangfei蛋白在机体中的生理作用.