抗松材线虫病马尾松胚性愈伤组织超低温保存

摘要

为使抗松材线虫病马尾松(Pinus massoniana Lamb.)胚性细胞保留幼年特征,阻止长期继代发生遗传变异,以抗松材线虫病马尾松马7-6及全172-1-1细胞系胚性愈伤组织为材料,通过正交试验及单因素试验探讨超低温保存(冷冻保护剂、预处理时间、解冻温度)对愈伤组织存活的影响,并对恢复生长的愈伤胚性维持状况进行评估.结果表明:预处理36～48 h,以2.5％ ～10.0％DMSO、0.4～0.5 mol·L-1蔗糖和15％PEG作为冷冻保护剂,经30～35℃ 解冻后,两细胞系的胚性愈伤组织细胞活性较高,愈伤恢复生长率达100％,所需恢复生长的时间也相对较短(马7-6细胞系23 d;全172-1-1细胞系15～19 d).超低温保存后的愈伤与正常增殖的愈伤组织在外观及显微结构上无明显差异,且低温保存后的愈伤组织仍具有分化的能力.