东北龙胆花芽蛋白质双向电泳条件的建立

摘要

初步建立了东北龙胆(Gentiana manshuica Kitagawa)花芽总蛋白质提取方法,以及东北龙胆花芽蛋白质组研究的双向电泳技术.从样品制备及溶解等方面进行了优化,解决了东北龙胆花芽蛋白质提取中色素、多糖、酚类物质等对双向电泳的干扰,确定了一种有效的蛋白溶解液(7 mol/L尿素,2 mol/L硫脲,4% CHAPS,40 mmol/L DTT,1%蛋白酶抑制剂混合物,2%的两性电解质pH=3～10).同时,对电泳其它环节也进行了优化,经考马斯亮兰染色后,可分辨蛋白质斑点数约1 000个.获得了重复性好、分辨率高的蛋白质双向电泳图谱.