正调控元件拷贝数对黑曲霉PglaA启动子的影响

摘要

为获得转录水平更高的强启动子,提高黑曲霉中重组蛋白表达量,研究在黑曲霉葡萄糖淀粉酶基因启动子PglaA基础上,构建分别含2、4、6个拷贝的正调控元件片段PglaA2R、PglaA4R、PglaA6R启动子.以黑曲霉木聚糖酶基因xynB为目的基因,研究正调控元件拷贝数对PglaA启动子的影响.构建黑曲霉表达载体pSZHG2R-xynB、pSZHG4R-xynB、pSZHG6R-xynB,采用农杆菌介导法转化黑曲霉CICC2462.获得目的基因表达框整合在葡萄糖淀粉酶基因位点的纯合黑曲霉重组菌株PglaA2R-xynB、PglaA4R-xynB、PglaA6R-xynB.经SDS-PAGE检测观察到重组菌株分泌约24.0 ku木聚糖酶蛋白条带.经酶活检测表明,木聚糖酶活力在第8天达最高,重组菌株PglaA4R-xynB(7705.36 U·mL-1)、PglaA6R-xynB(8466.32 U·mL-1)比PglaA2R-xynB(5890.77 U·mL-1)分别提高1.31倍和1.44倍.荧光定量PCR结果表明,重组菌株PglaA4R-xynB、PglaA6R-xynB的xynB基因mRNA比PglaA2R-xynB分别提高2.2倍和5.3倍.可知,PglaA启动子正调控元件多拷贝显著提高木聚糖酶表达.