抗菌肽Lactoferricin B的原核表达及其纯化

摘要

牛乳铁蛋白活性多肽(Lactoferricin B,LfcinB)是一种阳离子型抗菌肽,因其具有多种生物学功能,现已被认为具有能够替代传统抗生素的发展前景.然而,由于传统的分离制备方法存在诸多弊端,所以基于基因工程的原核表达技术在制备高纯度和高效表达的该蛋白方面具有极其深远的意义.研究旨在摸索出一套完整的利用原核表达技术制备LfcinB的分子生物学方法.依据大肠杆菌密码子偏爱性的原则,设计了LfcinB的基因序列,通过人工合成的方法获得该基因的优化序列,借助Barn H I和Sal I双酶切、连接等手段将其构建到原核表达载体pGEX-4T-2上,获得重组表达载体pGEX-4T-2-LCB,将该载体转化E.coli Rosetta(DE3).使用IPTG诱导,结果发现LfcinB在大肠杆菌中表达量超过20%.通过一系列蛋白纯化技术分离得到纯度达到95%以上的LfcinB融合蛋白.抑菌试验结果表明,重组抗菌肽LfcinB融合蛋白具有很好的抑菌活性.研究结果为人们使用基因工程技术制备抗菌肽LfcinB提供了具有重要参考价值的技术路线和理论依据.