锌指蛋白146下调对荧光素酶标记的胶质瘤细胞GL261-luc活性的影响

摘要

目的 观察DNA损伤修复蛋白——锌指蛋白146(RNF146)下调对荧光素酶稳转胶质瘤细胞株GL261-luc活性的影响.方法 通过干涉慢病毒感染的方法,下调荧光素酶稳转胶质瘤细胞株GL261-luc中RNF146的表达,经实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)和Western blot检测GL261-luc细胞中RNF146的敲减效率.Western blot检测RNF146下调后GL261-luc细胞中荧光素酶蛋白的表达水平.比较第1代、第15代和第30代GL261-luc细胞中荧光素酶活性.结果 RNF146干涉慢病毒感染能够下调GL261-luc细胞中RNF146基因表达约为85.7％(P<0.01);Western blot检测结果也显示GL261-luc细胞RNF146的蛋白表达下调超过85.0％(P<0.001).RNF146下调不影响荧光素酶基因的表达、酶的活性和酶的稳定性(P均>0.05).结论 用慢病毒感染下调GL261-luc细胞RNF146表达,不影响荧光素酶的表达、活性及稳定性,能够用于后续小动物体内成瘤后的活体成像研究.