锌指蛋白A20 RNAi腺病毒的制备及其对人脑胶质瘤细胞系U87细胞功能的影响

摘要

目的:进一步探讨A20与促进脑胶质瘤恶性增殖和抗细胞凋亡之间的关系,尝试今后在动物体内进行脑胶质瘤基因治疗的研究,通过构建针对A20基因的重组腺病毒干涉载体感染U87细胞系,观察其对细胞生存状态的影响.方法:在前期预实验的基础上构建对A20干涉效果最好的腺病毒干涉表达载体pSilencerTM adeno 1.0-CMV-A20R1,通过HEK-293细胞的包装后收获腺病毒并进行纯化,最后用此腺病毒再次感染人脑胶质母细胞瘤细胞U87,经RT-PCR、Western blot确认干涉效果;通过流式细胞术(FCM)观察A20表达抑制对U87细胞周期和细胞凋亡的影响.结果:完成了重组腺病毒干涉表达载体pSilencerTM adeno 1.0-CMV-A20R1在HEK-293细胞内的包装;对病毒进行纯化后获得了高滴度(1.1×1011 pfu/mL)的感染病毒,将其感染U87细胞系后,RT-PCR和Western blot结果证实U87细胞中A20 mRNA和蛋白的表达均受到明显抑制;FCM结果也证实U87-A20R1细胞内凋亡细胞明显增多.结论:重组A20腺病毒干涉载体可很好地抑制U87细胞内A20的表达且能导致细胞凋亡,该研究结果为临床上用新思路治疗脑胶质瘤提供了实验依据.