体外诱导M1型大鼠肺泡巨噬细胞对弓形虫增殖的影响

摘要

目的 探究体外诱导M1型大鼠肺泡巨噬细胞对弓形虫感染的影响.方法 体外用细菌脂多糖(LPS)+干扰素-γ(IFN-γ)诱导大鼠肺泡巨噬细胞极化为M1型,用实时荧光定量PCR方法检测巨噬细胞极化因子的变化,Western blot检测M1型巨噬细胞标志性蛋白诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的变化,进一步使用扫描电子显微镜技术对诱导效果进行鉴定.M1型巨噬细胞与弓形虫共同培养,Diff染色观察其对弓形虫感染增殖的影响.结果 与对照组相比,LPS+IFN-γ 刺激后,M1型巨噬细胞中相关因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、iNOS、CXCL10 mRNA、CXCL11 mRNA的相对表达量在6h升高(P<0.01),随后下降.Western blot结果显示,正常NR8383细胞不表达iNOS,LPS+IFN-γ 刺激后细胞开始表达iNOS,在24h表达最为明显.扫描电子显微镜下观察到LPS+IFN-γ 刺激细胞24h后,细胞表面突触增多、变长,细胞体积变大.正常NR8383细胞、M1型大鼠肺泡巨噬细胞分别与弓形虫进行共培养24h,Diff染色后,正常NR8383细胞内可以看到明显弓形虫增殖,而M1型大鼠肺泡巨噬细胞内几乎观察不到弓形虫.结论 M1型大鼠肺泡巨噬细可以明显抑制弓形虫的感染与增殖.