聚合酶链反应及微板杂交法对人乳头瘤病毒分型检测

摘要

目的:为适应临床人乳头瘤病毒分型检测,建立了通用引物扩增(GP-PCR)及微孔板杂交-ELISA检测法.方法:先进行GP-PCR,其中一条引物5'端标记有地高辛,探针标记有生物素,通过包被在微孔板上的亲和素预先固定;将扩增产物加入预先包被有HPV型特异寡核苷酸探针和HPV基因组混合探针的聚苯乙烯微孔板中,42℃杂交仅需20～30min;最后,用酶底物与所标记的酶进行显色反应,通过测定吸光度来判断结果.结果:本法HPV各型之间无交叉杂交;杂交灵敏度比PCR-琼脂糖凝胶电泳检测高100倍,最佳杂交时间为20～30min,重复性好,CV为8.75%;60例子宫颈癌标本的总检出率为92.5%,20例正常宫颈石蜡标本本法测定均为阴性.结论:该法特异性强,灵敏度高,操作简单,无放射性和E.B.污染,杂交时间短,检测成本低,便于临床常规应用.