基于Wnt/β-catenin信号通路养营活血汤对肝纤维化大鼠Wnt1、β-catenin和TGF-β1的影响

摘要

目的 研究养营活血汤对Wnt/β-catenin信号通路Wnt1、β-连环蛋白(β-catenin)和转化生长因子β1(TGF-β1)的影响,探讨养营活血汤抗大鼠肝纤维化的作用机制.方法 SPF级成年Wistar大鼠60只,随机分为正常对照组,肝纤维化模型对照组,养营活血汤高、中、低剂量治疗组,秋水仙碱治疗组.除正常对照组外,其余5组均采用皮下注射40％CCL4石蜡油混合液加猪血清造模方法建立肝纤维化模型,并给予相应药物干预.给药8周麻醉后取血,检测大鼠肝纤维化相关指标;并观察肝组织的病理改变;利用实时荧光定量PCR及Western blot法检测肝组织中Wnt1、β-catenin、TGF-β1 mRNA和蛋白表达.结果 病理结果显示,与正常对照组相比,模型对照组大鼠肝细胞出现变性、坏死,有空泡样改变,汇管区和中央静脉有炎性细胞浸润,纤维组织异常增生,假小叶形成;与模型对照组对比,各给药组肝细胞变性、坏死程度减轻,肝小叶结构破坏程度减轻,纤维组织增生减少,且养营活血汤高剂量组改善最明显.养营活血汤不同剂量组和秋水仙碱组大鼠血清肝纤维化标志物HA、LN、PCⅢ、Ⅳ-C的值均低于模型对照组(P均<0.01),且高剂量组大鼠血清肝纤维化指标低于秋水仙碱组(P<0.05).RT-PCR和Western blot结果显示:与正常对照组相比,模型对照组、养营活血汤不同剂量组和秋水仙碱组Wnt1、β-catenin、TGF-β1 mRNA表达水平均增高(P均<0.05),养营活血汤低、中、高剂量组和秋水仙碱组均低于模型对照组(P<0.01);养营活血汤中、 高剂量组和秋水仙碱组Wnt1、β-catenin、TGF-β1蛋白表达水平高于正常对照组(P均<0.05),低于模型对照组(P<0.01),高剂量组Wnt1、β-catenin、TGF-β1蛋白表达水平均低于秋水仙碱组(P均<0.01).结论 养营活血汤可降低大鼠肝纤维化相关血清指标,降低Wnt1、β-catenin、TGF-β1 mRNA和蛋白的表达水平,从而下调或抑制Wnt/β-catenin信号通路的激活过程,达到缓解纤维化的作用,且养营活血汤高剂量组效果较为显著.