pcDNA3/NT-3真核表达载体的构建及其表达

摘要

目的 构建大鼠神经营养因子3(NT-3)基因真核表达载体并观察其在真核细胞内的表达情况.方法 采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术从大鼠脑组织总RNA中扩增NT-3基因cDNA序列,将其克隆到真核表达载体pcDNA3中,经酶切鉴定和序列分析后,以阳离子脂质体Lipofectamine 2000介导转染L929细胞,应用免疫细胞化学和western blot鉴定NT-3在细胞内的表达.结果 RT-PCR产物为822bp的特异片段,重组质粒pcDNA3/NT-3酶切后产生822bp和5.2kb的片段,DNA测序证实822bp片段的碱基序列与大鼠NT-3基因序列完全一致,成功构建了pcDNA3/NT-3重组质粒.将其转染真核细胞后,免疫细胞化学、western blot结果表明NT-3能在真核细胞中正确表达.结论 成功构建了重组真核表达质粒载体pcDNA3/NT-3,为后续的研究奠定基础.