鼻咽癌基因治疗的实验研究

摘要

目的研究Survivin表达下调和p53过表达对鼻咽癌细胞CNE-2的靶向杀伤作用。方法扩增hTERT启动子不同区段,构建真核表达质粒pcDNA3.1-hTERT-Survivin,用于启动Survivin反义寡核苷酸的表达;扩增p53基因,克隆到pcDNA3.1质粒中,构建p53的过表达载体pcDNA3.1-p53;联合pcDNA3.1-hTERT-Survivin和pcDNA3.1-p53转染鼻咽癌细胞株CNE-2,RT-PCR和免疫印迹法检测p53和Survivin的表达情况,MTT法检测CNE-2细胞活率情况,Annexin V/PI双染色法检测共转后的细胞凋亡情况。结果成功扩增270 bp和728 bp 2种不同大小片断的hTERT启动子区域,并与CMV增强子连接,以GFP为报告基因检测发现,270 bp启动子区段能较有效启动基因的表达;进一步成功构建Survivin反义寡核苷酸表达质粒pcDNA3.1-hTERT-Survivin和p53过表达载体pcDNA3.1-p53;转染鼻咽癌细胞株CNE-2后检测表明Survivin表达下调和p53表达上调;MTT和流式细胞检测显示联合转染pcDNA3.1-hTERT-Survivin和pcDNA3.1-p53可诱导鼻咽癌细胞株CNE-2的凋亡。结论利用hTERT启动子和CMV增强子可有效启动Survivin反义寡核苷酸的表达转染鼻咽癌细胞CNE-2后可抑制Survivin的表达,同时联合过表达p53基因后,可以有效诱导鼻咽癌细胞CNE-2的凋亡,提示该方法可以成为有效治疗鼻咽癌的一种新的靶向治疗方法。