乙型肝炎病毒rtA181T突变与核质转运蛋白α2启动子去甲基化的关系

摘要

目的 研究乙型肝炎病毒（HBV）rtA181T突变与核质转运蛋白α2（KPNA2）启动子去甲基化之间的关系.方法 采用RT-qPCR和亚硫酸氢盐修饰后克隆测序法（BSP）检测人正常肝细胞株LO2和人肝癌细胞株HepG2细胞中KPNA2 mRNA水平及其启动子甲基化状态;将rtA181T突变型、野生型和空载体质粒转染LO2和HepG2细胞,采用RT-qPCR检测KPNA2 mRNA水平;构建萤光素酶报告基因载体pGL3-KPNA2并使其体外甲基化,分别与rtA181T突变型、野生型和空载质粒共同转染LO2细胞,采用双萤光素酶报告基因试验和BSP法检测其对KPNA2启动子转录活性及其甲基化状态的影响.结果 1）HepG2细胞中KPNA2 mRNA水平显著高于LO2细胞,而其KPNA2启动子甲基化率明显低于LO2细胞;2）转染了rtA181T突变型和野生型的LO2细胞中KPNA2 mRNA表达水平明显高于空载体对照细胞;3）rtA181T突变型能够使高甲基化状态的KPNA2启动子发生去甲基化作用促进其转录表达.结论 HBV rtA181T突变型在LO2细胞中可能通过KPNA2启动子去甲基化提高KP-NA2 mRNA水平.