多重PCR检测毒力型艰难梭菌的方法学研究及应用

摘要

目的 建立多重PCR方法检测毒力型艰难梭菌.方法 设计艰难梭菌种特异tpi引物和毒力基因tcdA、tcdB特异性引物,建立多重PCR方法.利用已知菌株,验证方法的特异性和最低检出限.与厌氧培养法、ELISA法比较其检测临床菌株和其毒素分泌的准确性.结果 多重PCR方法检测艰难梭菌的最低检出浓度为0.7 pg/μl,特异性为100％.53株厌氧培养法鉴定的艰难梭菌临床分离株,多重PCR方法检测tpi基因均为阳性,其中tcdA +/tcdB+为39株,tcdA-/tcdB-为14株.ELISA法检测毒素A/B显示23株为阳性、30株为阴性.23株ELISA法毒素A/B阳性的艰难梭菌多重PCR方法检测结果均为tcdA+ /tcdB+.结论 多重PCR方法可用于检测毒力型艰难梭菌具有较高的临床应用价值.