多重荧光定量PCR检测艰难梭菌感染的方法探索

摘要

目的：近年来，随着艰难梭菌流行菌株027等的出现，艰难梭菌的发病率及致死率越来越高，快速、准确检测艰难梭菌对临床决策非常重要。本研究旨在建立一种可以同时检测艰难梭菌主要毒素基因tcdA、tcdB的多重定量PCR方法。
　　方法：收集2014.10-2015.03月期间临床送检的大便标本，进行分离培养，可疑菌落经基质辅助激光解吸飞行时间质谱技术及扩增16sRNA鉴定，获得的菌株分别采用普通PCR及Taqman探针法多重定量PCR检测艰难梭菌毒素基因tcdA、tcdB及管家基因TPI。
　　结果：在收集到的107株符合要求的大便标本中，经鉴定共分离出20株艰难梭菌。普通PCR检测结果为：tcdA-tcdB-的菌株为4株， tcdA+tcdB+的菌株为16株，未发现tcdA-tcdB+的菌株，阳性率为18.7％。应用本研究设计的引物及探针对标准菌株进行检测发现tcdA扩增效率可达91%，最低检测限为101，TPI扩增效率仅为79%，最低检测限为102，未能成功检测到tcdB。Taqman探针法多重定量PCR由于TPI及tcdB探针设计不成功未能如期完成。
　　结论：我院分离的艰难梭菌毒素基因阳性的比例较高，需引起重视；本实验设计的引物及探针有待进一步改善。