稳定过表达环状RNA circ-Fam114a2膀胱癌T24细胞株的建立

摘要

目的 利用慢病毒载体建立稳定过表达环状RNA circ-Fam114a2的膀胱癌T24细胞株.方法 利用pLVX-CMV-mini-crRNA-EF1 GFP-Puro质粒,制备慢转录病毒pLVX-CMV-minicrRNA-EF1-GFP-Puro-circ-Fam114a2 (circ-Fam114a2)和pLVX-CMV-minicrRNA-EF1-GFP-Puro-Vector(Vector),并转染膀胱癌T24细胞系.用嘌呤霉素筛选阳性表达细胞,并用荧光显微镜,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和Northern印记等实验验证circ-Fam114a2基因成环及过表达情况.最后,通过CCK-8实验和克隆形成实验初步探究circ-Fam114a2对T24细胞增殖的影响.结果 转染并用嘌呤霉素药筛后的T24细胞在荧光显微镜下呈现出绿色荧光.qRT PCR显示过表达组细胞circ-Fam114a2水平是对照组的28倍,而Fam114a2 mRNA没有明显变化.Northern印迹显示circ-Fam114a2在T24细胞中成功成环并过表达.CCK-8实验和克隆形成实验表明过表达circ-Fam114a2显著抑制T24细胞增殖.结论 该实验成功建立了稳定高表达circ-Fam114a2的膀胱癌T24细胞模型,并初步探究circ-Fam114a2对膀胱癌细胞的增殖抑制作用.为进一步研究circ-Fam114a2在膀胱癌中的作用和机制奠定了基础.