lncRNA RHPN1-AS1靶向miR-485-5p调控骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭及其分子机制

摘要

目的:探讨lncRNA RHPN1反义RNA1(RHPN1-AS1)靶向miR-485-5p对骨肉瘤细胞增殖、凋亡、迁移、侵袭的影响和机制.方法:实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测20例骨肉瘤组织与其对应的癌旁组织、人正常成骨细胞hFOB1.19以及3种骨肉瘤细胞(U-2OS、SAOS-2、HOS)中RHPN1-AS1和miR-485-5p的表达水平.利用脂质体转染法将RHPN1-AS1小干扰RNA(si-RHPN1-AS1)、小干扰RNA阴性对照(si-NC)、miR-485-5p模拟物(miR-485-5p mimics)、miRNA阴性对照(miR-NC)分别转染U-2OS细胞,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白质印记(Western blot)检测细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)、p21、p27、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)和基质金属蛋白酶14(MMP-14)蛋白的表达.双荧光素酶报告基因实验和qRT-PCR验证RHPN1-AS1和miR-485-5p的靶向调控关系.结果:与癌旁组织比较,骨肉瘤组织中RHPN1-AS1的表达水平显著升高,miR-485-5p的表达水平显著降低(P<0.05);与hFOB1.19细胞比较,3种骨肉瘤细胞中RHPN1-AS1的表达水平显著升高,miR-485-5p的表达水平显著降低(P<0.05).与si-NC组比较,si-RHPN1-AS1组U-2OS细胞的活力显著降低,迁移和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2、MMP-9和MMP-14蛋白的表达水平显著降低,p21、p27和Bax蛋白的表达水平显著升高(P<0.05);与miR-NC组比较,miR-485-5p组U-2OS细胞的活力显著降低,迁移和侵袭能力显著降低,细胞凋亡率显著升高,Cyclin D1、Bcl-2、MMP-2和MMP-9蛋白的表达水平显著降低,p21和Bax蛋白的表达水平显著升高(P<0.05).RHPN1-AS1靶向负性调控miR-485-5p表达.干扰miR-485-5p表达逆转了抑制lncRNA RHPN1-AS1表达对骨肉瘤U-2OS细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响.结论:抑制RHPN1-AS1通过上调miR-485-5p抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡.