长春新碱通过lncRNA XIST/miR-485-5p调控宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭的分子机制

摘要

目的:探讨长春新碱对宫颈癌细胞增殖、迁移、侵袭的影响及其对lncRNA XIST/miR-485-5p通路的调控作用.方法:采用不同浓度的长春新碱处理宫颈癌细胞HeLa;pcDNA-NC、pcDNA-lncRNA XIST、miR-NC、miR-485-5p mimics分别转染入HeLa细胞;pcDNA-NC、pcDNA-lncRNA XIST、miR-NC、miR-485-5p mimics、miR-NC+pcDNA-lncRNA XIST、miR-485-5p mim-ics+pcDNA-lncRNA XIST分别转染入HeLa细胞后加入长春新碱处理细胞.采用MTT实验检测细胞活力,Transwell小室实验检测细胞迁移及侵袭能力,qPCR法检测lncRNA XIST、miR-485-5p表达,双荧光素酶报告基因实验检测lncRNA XIST与miR-485-5p的靶向关系,Western blotting法检测CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达.结果:与NC组比较,长春新碱不同剂量组细胞活力显著降低,迁移及侵袭细胞数减少,CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白水平降低,lncRNA XIST表达水平降低,miR-485-5p表达水平升高(均P<0.05).与pcDNA-NC组比较,pcDNA-lncRNA XIST组细胞活力及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平升高,迁移及侵袭细胞数增多(均P<0.05),而lncRNA XIST过表达可明显逆转长春新碱对HeLa细胞增殖、迁移及侵袭的作用.与miR-NC组比较,miR-485-5p组细胞活力及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低,迁移及侵袭细胞数减少(均P<0.05),而miR-485-5p过表达可增强长春新碱对HeLa细胞增殖、迁移及侵袭的作用.双荧光素酶报告基因实验证实ln-cRNA XIST可竞争性结合miR-485-5p.与miR-NC+pcDNA-lncRNA XIST+高剂量组比较,miR-485-5p+pcDNA-lncRNA XIST+高剂量组细胞活力及CyclinD1、MMP2、MMP9蛋白表达水平降低,迁移及侵袭细胞数减少(均P<0.05).结论:长春新碱可通过调控lncRNA XIST/miR-485-5p而减弱宫颈癌细胞增殖、迁移及侵袭能力.