PUMA通过线粒体途径诱导骨肉瘤细胞凋亡的研究

摘要

目的:研究p53上调凋亡调控因子(PUMA)对骨肉瘤细胞凋亡的影响及机制。方法:在骨肉瘤细胞F5M2中转染PUMA过表达载体,同时转染对照阴性载体,以qRT-PCR和Western blot法测定转染后细胞中PUMA表达情况,以流式细胞术检测细胞凋亡情况,用JC-1法检测细胞线粒体膜电位,以Western blot法测定线粒体和胞浆中细胞色素C(Cyt C)蛋白表达情况,同时检测细胞中剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、剪切的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶9(Cleaved Caspase-9)蛋白水平。结果:转染PUMA过表达载体后的F5M2细胞中PUMA mRNA和蛋白水平升高,而转染对照阴性载体对F5M2细胞中PUMA mRNA和蛋白水平没有影响。过表达PUMA后的F5M2细胞凋亡率升高,细胞线粒体膜电位下降,线粒体中Cyt C蛋白水平降低,胞浆中Cyt C蛋白水平升高,同时细胞中Cleaved Caspase-3、Cleaved Caspase-9蛋白水平也升高,与未做转染的F5M2细胞比,差异有统计学意义(P0.05)。结论:PUMA通过促进线粒体中Cyt C释放,降低线粒体膜电位,激活Caspase-3诱导骨肉瘤细胞凋亡。