实时荧光定量PCR检测志贺氏菌方法的实验研究

摘要

目的 建立志贺氏菌实时荧光定量PCR快速方法,探讨在志贺氏菌感染检测和食源性污染监测中的应用价值.方法 根据志贺氏菌ipaH基因设计引物和探针,建立实时荧光定量PCR检测志贺氏菌的诊断方法;通过特异度、敏感度、稳定性和重复性,以验证方法的可行性.结果 成功构建了志贺氏菌重组质粒标准品,为方法学建立奠定基础;通过特异度、敏感度、稳定性和重复性验证,结果表明具有较好的特异度,最低检测限为103 copies/ml,相当于100cfu/ml的菌细胞,并具有良好的稳定性和重复性.结论 利用实时荧光定量PCR方法检测志贺氏菌,可直接用于临床粪便中沙门氏菌的快速检测,也可用于分离菌株的鉴定,以及食品、乳品等的检测,对志贺氏菌感染诊断,提高食(乳)品安全的卫生监督检测具有重要的意义.