实时荧光双重SRCA方法检测食品中沙门氏菌和志贺氏菌研究

目录

声明

摘要

1．1研究背景及意义

1．2沙门氏菌简介

1．2．1沙门氏菌生物学特性

1．2．2沙门氏菌流行病学分析

1．2．3沙门氏菌特异性基因选择

1．3志贺氏菌简介

1．3．1志贺氏菌生物学特性

1．3．2志贺氏菌流行病学分析

1．3．3志贺氏菌特异性基因选择

1．4食源性致病菌检测方法

1．4．1传统检测方法

1．4．2免疫学检测方法

1．4．3分子生物学检测方法

1．4．4生物传感器检测方法

1．5跨越式滚环等温扩增技术

1．6双重RF-SRCA方法

1．6．1技术概要

1．6．2染料选择

1．7本研究的主要内容

1．8技术路线

2．1．1试验菌株

2．1．2培养基与试剂

2．1．3试验仪器与设备

2．2试验方法

2．2．1菌株的培养

2．2．2基因组DNA的提取和检测

2．2．3 SRCA引物设计与筛选

2．2．4引物的处理与保存

2．2．5单重RF-SRCA预反应体系及条件

2．3．2 Mg2+添加量的优化

2．4双重RF-SRCA可行性试验及引物优化

2．6单重RF-SRCA扩增产物测序分析

2．7特异性试验

2．8灵敏度分析

2．8．3双重RT-PCR灵敏度分析

2．9人工污染乳制品中沙门氏菌和志贺氏菌的检出限分析

2．9．1人工污染样品

2．9．4双重RT-PCR检出限分析

2．10实际样品中沙门氏菌和志贺氏菌检测

2．10．2国标方法对实际样品进行检测

3结果与分析

3．1基因组DNA提取与检测

3．1．1 DNA模板的完整性验证

3．2 RF-SRCA反应体系和反应条件的优化

3．2．1反应温度的优化

3．2．2 Mg2+添加量的优化

3．2．3 dNTPs添加量的优化

3．2．4Bst DNA聚合酶缓冲液添加量的优化

3．2．5引物添加量的优化

3．2．6Bst DNA聚合酶添加量的优化

3．2．7荧光染料添加量的优化

3．3．1双重RF-SRCA的可行性分析

3．3．2双重RF-SRCA引物浓度优化

3．3．3双重RF-SRCAA最终反应体系

3．4单重RF-SRCA扩增产物测序分析

3．5 RF-SRCA引物特异性分析

3．6RF-SRCA的灵敏度分析

3．6．2双重RF-SRCA灵敏度分析

3．6．3双重RT-PCR灵敏度分析

3．7人工污染乳制品中沙门氏菌和志贺氏菌检出限分析

3．7．2双重RF-SRCA检出限分析

3．7．3双重RT-PCR检出限分析

3．8实际样品中沙门氏菌和志贺氏菌检测

4讨论

5．1结论

5．2展望

参考文献

作者简历

硕士期间发表学术论文

致谢