人巨细胞病毒pp150-gp52蛋白原核可溶性表达与IgM捕获ELISA方法建立和应用

摘要

目的 原核系统内表达并纯化巨细胞病毒pp150-gp52融合蛋白优势抗原表位,建立IgM捕获ELISA方法并应用.方法 通过重叠PCR技术扩增获得巨细胞病毒pp150-gp52优势片段核酸序列,在原核系统内可溶性表达DsbCpp150-gp52融合蛋白并纯化,用Western blot和ELISA检测融合蛋白的特异性和应用价值.结果 纯化获得的融合蛋白DsbC-pp150-gp52经酶标记建立IgM捕获ELISA方法,检测60份临床阳性血清和60份健康人血清.其中以酶标记DsbC-pp150-gp52蛋白建立的捕获ELISA法阳性检出率96.7％,阴性检出率100％,初步验证DsbC-pp150-gp52融合肽具有非常好的抗原特异性.结论 融合蛋白DsbC-pp150-gp52在大肠埃希菌中以可溶性表达形式存在,获得的高纯度重组融合蛋白具有抗原性和特异性强的特点,采用IgM捕获ELISA的实验方法,可开发检测试剂盒用于风疹病毒的早期检测.