杆状病毒AcMNPV p35基因的克隆表达及多抗制备

摘要

用PCR方法扩增得到苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒(Autographa californica nucleopolyhedrovirus,AcMNPV)p35基因,将其克隆至质粒pET-32a(+)上,构建得到重组质粒pET-p35,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导,表达了1条约为 55 ku的蛋白带.以Ni+2NTA偶连抗体检测证明所表达的蛋白为带有组氨酸的融合蛋白.采用割胶回收的方法纯化融合蛋白,以纯化的融合蛋白制备多克隆抗体,效价为1/1 024.免疫印迹分析表明,该抗血清能与感染苜蓿丫纹夜蛾核多角体病毒的细胞蛋白样品发生特异性反应.