肺炎链球菌自溶素LytA小片段免疫活性的研究

摘要

通过对肺炎链球菌(ATCC49619)自溶素lytA全序列基因的克隆和表达,获得部分小片段蛋白,初步研究其免疫活性.根据GenBank中肺炎链球菌M66菌株lytA基因序列(FN549899.1)设计合成特异性引物,采用PCR技术从肺炎链球菌(ATCC49619)基因组中扩增lytA全序列片段,构建克隆载体PGM-T/lytA,测序后与M66菌株比对显示,肺炎链球菌ATCC49619株碱基序列内存在新酶切位点BamH Ⅰ.以BamH Ⅰ、HindⅢ双酶切后,目的基因出现2个小片度,以约500 bp小片段构建重组表达载体pET32a(+)/lytA',经IPTG诱导后等电点洗脱法获取纯化的目的蛋白LytA'.将LytA'免疫小鼠,测定抗体效价,同时进行Western blot鉴定.测序显示肺炎链球菌ATCC49619菌株与M66菌株的lytA全基因序列同源性为98％,具有高度保守性,碱基不同主要位于下游部分,在444～450 bp之间新出现BamH Ⅰ酶切位点.构建的小片段重组表达质粒pET32a(+)/lytA'在BL21(DE3)中高效表达,获得纯化蛋白LytA',免疫BALB/c小鼠产生的抗体效价为1:32,经Western blot证实该蛋白具有较好的抗体结合活性,为进一步应用于疫苗及药物等相关研究奠定基础.