丙型肝炎病毒核心基因置换对病毒复制和感染影响的初步研究

摘要

本文旨在探讨丙型肝炎病毒(HCV)核心(core)蛋白在病毒复制和感染中的作用,采取基因置换的方法,用HCV 1b型J4株的核心基因平行置换2a 型J6JFH1株的核心区,构建了FL-J6JFH/J4 core嵌合复制子.体外制备RNA转录体,以脂质体介导转染Huh7.5.1肝癌细胞.转染后第5天,用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)检测细胞内HCV RNA水平.第8天,以丙型肝炎患者血清为一抗,免疫荧光法(IFA)检测转染细胞内HCV蛋白表达.同时收集转染后第8天的细胞上清液,感染na(1)ve Huh7.5.1肝癌细胞,72 h后IFA检测HCV蛋白表达.结果显示,FL-J6JFH/J4 core 转染组第5天细胞内RNA水平与野生型FL-J6JFH1接近,无显著差异(n＝4,P>0.05).免疫荧光检测显示,FL-J6JFH/J4 core 转染细胞后第8天及其上清液感染的na(1)ve Huh7.5.1细胞的HCV阳性细胞数都低于野生型.本研究结果初步表明,HCV各株间核心基因的替换会影响HCV的蛋白翻译和感染性病毒颗粒的产生与释放.