荧光聚合酶链反应检测HBV患者拉米夫定治疗过程中的YMDD变异

摘要

目的 建立一种在乙型肝炎拉米夫定治疗过程中产生的多聚酶酪氨酸(Y)-蛋氨酸(M)-天门冬氨酸(D)-天门冬氨酸(D)(YMDD主型区)基因变异的检测方法.方法 设计包含两个变异位点(I/V)和无变异参照位点的3条下游引物,与同一条上游引物和探针建立3管PCR反应体系,对服用拉米夫定的100位患者的300份血清通过实时荧光PCR反应后的CT值判断是否发生已知(I/V)位点的变异.结果 服药6个月检测未发现YMDD变异,服药9个月时检出YIDD变异5例,YVDD变异7例,YIDD/YVDD共同变异3例,变异率分别为5%、7%、3%.服药1年时检出YIDD变异10例,YVDD变异12例,YIDD/YVDD共同变异5例,变异率分别为10%、12%、5%,服药1年总变异率达27%.变异的发生与肝功能异常与HBVDNA病毒的反跳均相关(P＜0.05).结论 该法对乙型肝炎拉米夫定治疗引起的基因变异检测方法简便、灵敏、快速、廉价,通过联合HB-VDNA与肝功能的检测对乙型肝炎患者的抗病毒治疗有重要临床意义.