MLN4924导致的成熟脂肪细胞衰老促进乳腺癌细胞的迁移与侵袭

摘要

目的 目前化疗药物致细胞衰老的研究鲜有关注终末分化细胞,脂肪组织在乳房中占比很高,且肥胖与乳腺癌的发病密切相关.文章旨在探讨一种潜在的新型化疗药物MLN4924是否导致成熟脂肪细胞的衰老及衰老的脂肪细胞对乳腺癌细胞的影响.方法 将分化成熟的脂肪细胞分为4个组,3天对照组(DMSO处理72 h),3天Mln组(Mln4924处理72 h),6天对照组(DMSO处理72 h,无药培养基中继续维持72 h),6天Mln组(Mln4924处理72 h,无药培养基中继续维持72 h).用衰老相关标记物β-衰老半乳糖苷酶(SA-β-gal)、p53、p21、p16、Rb检测脂肪细胞的衰老;采用qPCR和ELISA检测炎症相关因子的表达与分泌;将乳腺癌细胞分为对照组和Mln组,用收集的脂肪细胞条件培养基培养乳腺癌细胞48 h,使用CCK8试剂检测乳腺癌细胞的增殖,Transwell小室法检测乳腺癌细胞的迁移与侵袭,Western blot检测处理后乳腺癌细胞上皮-间充质转换(EMT)相关蛋白的表达.结果 6天Mln组中被染成绿色的脂肪细胞SA-β-gal阳性细胞率(11.71％)明显多于6天对照组(2.98％),差异有统计学意义(P<0.05).Western blot的结果显示,Mln组较对照组脂肪细胞中p53、p21蛋白的表达明显增加(P<0.01),p16的表达降低(P<0.01).3天Mln组和6天Mln组炎症因子IL-6、TGF-β、TNF-α、CCL2及基质金属蛋白酶MMP1、MMP2 mRNA水平皆较其对照组上调(P<0.05).ELISA结果也显示,3天Mln组IL-6(200.41±13.60)、TGF-β(76.29±4.18)均超过3天对照组(130.56±14.70)、(58.45±2.93),差异有统计学意义(P<0.05),6天Mln组IL-6(179.13±4.94)、TGF-β(125.24±0.09)均超过6天对照组(120.27±31.64)、(32.00±14.76),差异有统计学意义(P<0.05).Transwell迁移和侵袭实验结果显示Mln组被结晶紫染成紫色的细胞数量明显高于对照组,即Mln组穿过膜的MDA-MB-231细胞更多.在衰老的脂肪细胞中,观察到6天Mln组较6天对照组MMP2和MMP9蛋白表达的显著升高(P<0.01).在条件培养基培养48 h后的MDA-MB-231细胞中,观察到Mln组的E-cadherin较对照组明显下调(P<0.01),而Vimentin和Fibronectin上调(P<0.01).结论 MLN4924处理导致成熟脂肪细胞衰老;衰老的脂肪细胞分泌炎症因子并促进人乳腺癌细胞的迁移与侵袭.