Eotaxin原核表达载体的构建及初步表达

摘要

目的:获得人嗜酸性粒细胞趋化因子Eotaxin基因,构建其原核表达载体,并初步表达成熟的Eotaxin,为进一步构建其N-端突变体,检测其生物学活性作准备。方法:提取外周血单个核细胞细胞总RNA,经RT-PCR扩增编码人Eotaxin全长cDNA序列,并将其克隆至T载体进行序列测定,然后构建于原核表达载体PET30 a+中,并转入大肠杆菌表达。结果:RT-PCR扩增得到了400 bp左右的DNA片段,序列分析发现其中包含了GenBank中报道的编码Eotaxin cDNA序列,并获得了正确表达。结论:Eotaxin cDNA的克隆及其原核表达载体的构建及表达,为进一步构建其N-端突变体,纯化和检测其生物学活性奠定了基础。