中介蝮Asn49-PLA2基因原核表达载体的构建及初步表达

摘要

以来自中介蝮(G.intermedius)毒腺cDNA文库的3个新Asn49-PLA2基因(GI4-PLA2,GI5-PLA2及其突变体GI5′-PLA2)为模板,用PCR及DNA重组技术,将三个PLA2基因克隆到原核表达载体pQE-30,并在宿主菌E.coli Rosseta(DE3)中进行诱导表达.Bam HⅠ/HindⅢ双酶切及测序结果提示,成功构建了3个原核表达载体(pQE-30/GI4-PLA2,pQE-30/GI5-PLA2,pQE-30/GI5′-PLA2).SDS-PAGE结果表明,中介蝮的3个Asn49-PLA2基因在大肠杆菌中实现表达,而且在37℃、1mMIPTG的诱导条件下,GI4-PLA2和GI5-PLA2的最佳表达时间为25h,而GI5′-PLA2在15h有较高水平的表达.