人C6orf210基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达

摘要

为了构建人C6orf210基因原核表达载体,并在E.coli BL21中表达并纯化。采用RT-PCR扩增人C6orf210基因片段,并将其克隆到原核表达载体Pet21a中,构建重组质粒pET21a-C6orf210。经限制性内切酶EcoRⅠ与XhoⅠ双酶切鉴定及序列测定后,转化E.coli BL21,经IPTG诱导表达融合蛋白。结果显示获得全长为1188 bp的人的C6orf210基因片段。以构建的重组质粒pET21a-C6orf210转化E.coli BL21后,经IPTG诱导,表达出相对分子质量(Mr)约66000的融合蛋白。经SDS-PAGE、Western blot分析显示,诱导表达的蛋白为C6orf210。