CD40配体诱导小鼠B淋巴瘤细胞分化抑制因子3下调表达的研究

摘要

目的:研究CD40配体(CD40L)对小鼠未成熟B淋巴瘤细胞(WEHI-231细胞)分化抑制因子3(Id3)表达的影响.方法:用RT-PCR技术从WEHI-231细胞总RNA中扩增小鼠Id3(mId3)cDNA,将其亚克隆至p3FLAG-CMV-10载体;以p3FLAG-Id3-CMV-10为模板,用PCR扩增3FLAG-Id3融合基因,将其亚克隆至逆转录病毒载体pMX-CITE/IRES-EGFP中;通过脂质体转染技术将重组逆转录病毒载体(pMX-3FLAG-Id3-EGFP)转染Phoenix-ecotropic包装细胞系;将pMX-3FLAG-Id3-EGFP逆转录病毒转导WEHI-231细胞,转导48 h后的WEHI-231细胞与CD40L/NIH3T3和NIH3T3细胞共培养24～48 h.转导细胞经有限稀释法建立mld3基因稳定转染细胞系.mId3基因稳定转染细胞与CD40L/NIH3T3和NIH3T3细胞共培养24 h后,用Western blot法检测3FLAG-mId3融合蛋白的表达.结果:pMX-3FLAG-Id3-EGFP转导WEHI-231细胞后,EGFP阳性细胞比例随时间呈下降趋势;单独用培养液培养或与NIH3T3细胞共培养的pMX-3FLAG-Id3-EGFP/WEHI-231细胞,24～48 h后,EGFP阳性细胞率呈逐渐下降趋势;而与CD40L/NIH3T3细胞共培养的pMX-3FLAG-Id3-EGFP/WEHI 231细胞,EGFP阳性细胞率基本保持不变.稳定表达3FLAG-Id3融合蛋白的WEHI-231细胞与CD40L/NIH3T3和NIH3T3细胞共培养24 h后,Western blot结果显示,CD40L刺激可明显抑制3FLAG-Id3-EGFP/WEHI-231中Id3的表达.结论:CD0L可能通过对Id3的降解而缓解Id3诱导的细胞生长抑制作用.