抑制plk1表达导致胃癌细胞cyclinB/cdc2复合体活性升高

摘要

目的观察抑制polo样激酶基因1(plk1)表达对胃癌细胞株MKN45的cyclinB/cdc2复合体(MPF)及细胞周期的影响.方法化学合成小片断干扰RNA(siRNA)阻断MKN45细胞plk1基因的表达;实时定量PCR及Western印迹检测干扰前后plk1 mRNA及蛋白质表达的变化;倒置显微镜观察细胞形态的变化;流式细胞仪检测MKN45细胞周期分布的变化;Western印迹检测cyclinB与cdc2表达水平的变化,激酶活性分析检测cdc2激酶活性变化.结果经靶向plk1的siRNA作用后,plk1 siRNA mRNA及蛋白质表达明显下降;较多MKN45细胞变圆及呈现G2期细胞DNA含量(P＜0.05);cyclinB平均表达水平在48及72 h,较对照siRNA组升高了82.38%和32.89%(P＜0.05),cdc2表达水平无明显变化,但其平均活性在48及72 h较对照siRNA组升高了29.34%和80.33%(P＜0.05).结论PLK1与其下游的cyclinB/cdc2复合体活性之间在MKN45细胞有丝分裂的前后期可能存在着不同的调控机制,PLK1在MKN45细胞有丝分裂的启动及退出方面均发挥关键作用.