TRPV1修饰BMSCs治疗脑缺血再灌注损伤大鼠的研究

摘要

目的 探讨SPIO标记3.0T磁共振成像辅助示踪技术在TRPV1基因修饰BMSCs治疗脑缺血再灌注损伤大鼠的相关影响.方法 提取并培养鼠源骨髓间充质干细胞(BMSCs),利用流式细胞仪进行鉴定.通过Cas-9技术构建TRPV1的过表达载体,利用慢病毒转染BMSCs,根据病毒转染情况将BMSCs分成3组,即空白对照组、阴性对照组和过表达载体组.利用RT-PCR和Western blot法检测TRPV1过表达载体转染后对BMSCs的促神经分化作用.利用超顺磁性氧化铁(SPIO)试剂盒标记BMSCs染色,构建缺血再灌注损伤SD大鼠模型.利用3.0T磁共振成像SPIO标记BMSCs的归巢检测.结果 1)BMSCs的表面蛋白CD44和CD29的表达为60.2％和58.3％;CD34和CD45表达为3.4％和2.6％;2)慢病毒可以将TRPV4过表达载体质粒转染至BMSCs细胞内,且效率较高,为90％以上;3)体外细胞实验结果显示,过表达载体组TRPV4,Peripherin和NSE的mRNA相对表达量和蛋白表达量要明显高于空白对照组和阴性对照组(P＜0.05);4)BMSCs细胞可以与超顺磁性氧化铁(SPIO)相结合,从而可以作为示踪分子,检测后续BMSCs细胞尾静脉注射后BMSCs的示踪行为;5)相较于BMSCs组,将TRPV1基因过表达载体转染BMSCs后,可以更好的保护脑组织.结论 TRPV1过表达载体可以促进BMSCs向神经细胞分化,且对缺血再灌注损伤SD大鼠具有一定程度的保护作用.