VEGF联合BMSCs移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的实验研究

摘要

研究目的：
　　本研究通过制备大鼠大脑中动脉脑缺血再灌注损伤模型，采用血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）联合骨髓间充质干细胞（bone marrow stromal cells，BMSCs）移植与单用BMSCs或单用VEGF治疗脑损伤，观察神经功能评分、脑组织梗死面积及MAP-2表达水平变化，探讨VEGF和BMSCs联合治疗对大鼠脑缺血再灌注缺血损伤的神经恢复作用及机制。
　　研究方法：
　　通过全骨髓培养法和细胞贴壁法培养获得BMSCs，利用改良线栓法制作SD大鼠（Sprague-Dawley rat,SD rat）大脑中动脉缺血再灌注模型(middle cerebral artery occlusion,MCAO)(n=48)后，根据完全随机原则分为，磷酸盐溶液对照组（B组），BMSCs移植组（C组）、VEGF组（D组）和BMSCs+VEGF治疗组（E组）。A组假手术组（n=12）麻醉后，分离至颈内动脉，不做处理即缝合皮肤。C、E组缺血再灌注24h后，通过尾静脉分别注射2×106 BMSCs，B组予以磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution, PBS)注射，D、E组2天后VEGF鼻腔给药。造模成功后24小时及治疗14天时给大鼠进行神经功能评分。在第14天处死大鼠，2，3，5-氯化三苯基四氮唑(2,3,5-triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色观察梗死体积，苏木素-伊红染色(Hematoxylin&Eosin,HE)染色观察细胞形态结构，免疫组化测定微管相关蛋白2(microtubule-associated protein2, MAP-2)的表达。
　　研究结果：
　　1.神经行为学评分：假手术组0分，PBS组3.41±0.51、BMSCs组2.58±0.51、VEGF组2.67±0.47、BMSCs+VEGF组1.91±0.46分。B组明显高于C组、D组，E组，具有明显统计学差异（P<0.05），BMSCs+VEGF组与其它各治疗组比较差异均有显著性意义（P<0.05）。
　　2.脑组织切片HE染色显示：PBS组组织明显水肿，细胞间隙增大，神经细胞体积增大，空泡变性；BMSCs+VEGF组细胞受损程度在各组中最轻，神经细胞数量多，胞浆丰富，低倍镜下可见散在小的软化灶，其余组织结构相对较好。
　　3.梗死体积：假手术组、PBS对照组、BMSCs移植组、VEGF组、BMSCs+VEGF联合组脑梗死体积依次为0 mm3、239.58±6.89mm3、188.83±10.23mm3、186.58±8.45mm3、126.92±12mm3。BMSCs组、VEGF组与PBS对照组比较差异有显著性意义（P<0.05）。BMSCs+VEGF组与其它治疗组比较差异均有显著性意义（P<0.05）。BMSCs移植组与VEGF组比较差异无显著性意义。
　　4. MAP-2免疫组化染色：MAP-2表达A组0.701±0.014，B组0.304±0.023，C组.413±0.0380，D组0.419±0.019，E组0.614±0.035。以B组为最低，与各治疗组相比均具有统计学差异（P<0.05），C组、D组与E组相比有统计学差异（P<0.05）。
　　结论：
　　1.VEGF和 BMSCs移植联合治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的疗效优于单用VEGF或BMSCs移植。
　　2.VEGF和 BMSCs移植联合治疗促进大鼠脑缺血再灌注损伤神经功能修复的作用机制之一可能是增加了MAP-2的表达。

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前言

1. 材料与方法

2. 实验方法

3. 结 果

4. 讨 论

5. 结 论

参考文献

综述:血管内皮生长因子对骨髓间充质干细胞移植治疗缺血性脑血管疾病的影响

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