氯吡格雷对BMSCs移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤的影响

摘要

目的：
　　制备大鼠大脑中动脉缺血（Middle cerebral artery occlusion，MCAO）模型后，分别采用单独骨髓间充质干细胞（Bone marrow stromal cells，BMSCs）移植及单独氯吡格雷治疗与氯吡格雷联合BMSCs移植治疗，观察比较神经功能评分、脑组织梗死面积及Bcl-2、Bax因子表达水平变化，探讨氯吡格雷对BMSCs移植治疗大鼠脑缺血再灌注损伤是否有协同作用及可能机制。
　　方法：
　　选取200g左右SD大鼠处死后取其长骨，采用全骨髓培养法体外培养大鼠BMCSs，选择3-5代细胞用PBS缓冲液稀释并定容制成2×106/ml细胞混悬液备用。线栓法制作大鼠MCAO模型若干，将到达评分标准的大鼠模型随机分为模型对照组（B组，n=12）、氯吡格雷组（C组，n=12）、单独BMCSs移植组(D组，n=12)及氯吡格雷联合 BMCSs移植组(E组，n=12)，另将部分大鼠只切开皮肤分离至翼腭动脉后即缝合，为假手术组（A组，n=12）。在大鼠MCAO模型制作成功后24小时，D及E组选择尾静脉途径给予已定容的细胞混悬液1ml/每只异体移植，C及E组大鼠给予氯吡格雷25mg/kg灌胃并持续灌胃至处死共14天，A组不做任何处理。造模成功后24小时及治疗14天时给大鼠进行神经功能评分，并在14天处死大鼠，取其脑组织行HE染色、TTC法测脑梗死面积及Bcl-2、Bax蛋白免疫组化检测等进一步处理。
　　结果：
　　1、大鼠神经功能评分结果表明，B组、C组、D组及E组经干预后评分分别为3.50±0.67、2.25±0.62、2.00±0.66、1.75±0.62((x)±s，分)，除B组外，其他组别前后比较均有显著性差异（P<0.05），提示三种干预方式均能促进大鼠神经功能恢复，其中各组间两两比较均有显著性差异，提示 D组优于 C组，E组效果最好（P<0.05）。
　　2.TTC法测量脑梗死体积，B组、C组、D组及 E组依次为209.64±6.52、138.58±4.51、111.35±4.53、77.13±3.70((x)±s，mm3)。各组间两两比较，差异均有显著性意义(P<0.05)，E组梗死面积最小。
　　3.Bcl-2免疫组化结果显示A组、B组、C组、D组及E组分别为8.42±1.03，14.07±1.25，26.03±2.36，32.74±2.35，43.72±3.14（(x)±s，个），A组为正常组，余四组E组阳性细胞数量最多，D组较C组细胞数量增加，B组细胞数最少。
　　4.Bax免疫组化结果显示A组、B组、C组、D组及E组分别为7.01±0.35，39.84±2.09，29.92±1.89，21.17±1.71，11.36±1.56（(x)±s，个），各组两两比较均有显著性差异(P<0.05)，其中A组为正常组，余四组 E组阳性细胞数量最少，D组较C组细胞数量减少，B组细胞数最多。
　　结论：
　　1、氯吡格雷和BMSCs移植联合治疗脑缺血再灌注损伤的疗效优于单氯吡格雷或单BMSCs移植治疗。
　　2、氯吡格雷对BMSCs移植治疗脑缺血再灌注损伤有协同作用。
　　3、氯吡格雷对BMSCs移植治疗脑缺血再灌注损伤有促进作用，可能机制为增强了上调Bcl-2并下降Bax的作用。

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