氯吡格雷对BMSCs移植治疗大鼠缺血再灌注脑损伤的影响

摘要

目的:制备大鼠大脑中动脉缺血(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型后,分别采用单独骨髓间充质干细胞(Bone marrow stromal cells,BMSCs)移植及单独氯吡格雷灌胃治疗与氯吡格雷灌胃联合BMSCs移植治疗,观察比较神经功能评分、脑组织梗死面积及Bcl-2、Bax因子表达水平变化,探讨氯吡格雷对BMSCs移植治疗大鼠缺血再灌注脑损伤的促进作用及可能机制.rn 方法:选取200g左右SD大鼠处死后取其长骨,采用全骨髓培养法体外培养大鼠BMCSs,选择3-5代细胞用PBS缓冲液稀释并定容制成2×106/ml细胞混悬液备用.线栓法制作大鼠MCAO模型若干,将到达评分标准的大鼠模型随机分为模型对照组(B组,n=12)、氯吡格雷灌胃组(C组,n=12)、单独BMCSs移植组(D组,n=12)及氯吡格雷灌胃联合BMCSs移植组(E组,n=12),另将部分大鼠只切开皮肤分离至翼腭动脉后即缝合,为假手术组(A组,n=12).在大鼠MCAO模型制作成功后24小时,D及E组选择尾静脉途径给予己定容的细胞混悬液1 ml/每只异体移植.C及E组大鼠给予氯毗格雷25mg/kg灌胃并持续灌胃至处死共14天,A组不做任何处理.造模成功后24小时及治疗14天时给大鼠进行神经功能评分,并在14天处死大鼠,取其脑组织行HE染色、TTC法测脑梗死面积及Bcl-2.Bax蛋白免疫组化检测等进一步处理.rn 结果:1、大鼠神经功能评分结果表明,B组、C组、D组及E组经干预后评分分别为3.50±0.67、2.25±0.62、2.00±0.66、1.75±0.62((-x)±s,分),除B组外,其他组别前后比较均有显著性差异(P<0.05),提示三种干预方式均能促进大鼠神经功能恢复,其中各组间两两比较均有显著性差异,提示D组优于C组,E组效果最好(P<0.05).rn 2.TTC法测量脑梗死体积,B组、C组、D组及E组依次为209.64±6.52、138.58±4.51、111.35±4.53、77.13±3.70((-x)±s,mm3).各组间两两比较,差异均有显著性意义(P<0.05),E组梗死面积最小.rn 3.Bcl-2免疫组化结果显示A组、B组、C组、D组及E组分别为8.42±1.03、14.07±1.25、26.03±2.36、32.74±2.35、43.72±3.14((-x)±s,个),A组为正常组,余四组E组阳性细胞数量最多,D组较C组细胞数量增加,B组细胞数最少.rn 4.Bax免疫组化结果显示A组、B组、C组、D组及E组分别为7.01±0.35、39.84±2.09、29.92±1.89、21.17±1.71、11.36±1.56((-x)±s,个),各组两两比较均有显著性差异(P<0.05),其中A组为正常组,余四组E组阳性细胞数量最少,D组较C组细胞数量减少,B组细胞数最多.rn 结论:1.氯毗格雷灌胃和BMSCs移植联合治疗脑缺血再灌注损伤的疗效优于单氯毗格雷灌胃或单BMSCs移植治疗.rn 2.氯毗格雷对BMSCs移植治疗脑缺血再灌注损伤有促进作用.作用机制可能为上调Bcl-2蛋白的表达并降低Bax蛋白的表达.抑制细胞凋亡.