丝裂原活化蛋白激酶转导通路在葛根总黄酮诱导的急性早幼粒细胞白血病NB4细胞凋亡中的作用

摘要

目的 探讨葛根总黄酮(PRF)诱导的急性早幼粒细胞白血病NB4细胞凋亡与丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)转导通路相关信号分子的关系及意义.方法 将NB4细胞分为对照组[以0.025％二甲基亚砜(DMSO)代替PRF]和10、30、50 μg/ml PRF组,作用24、48、72h后用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞增殖抑制率,作用48 h后用激光共聚焦显微镜观察细胞核形态学变化.将NB4细胞分为对照组(加入0.025％ DMSO)和10、30、50 μg/ml PRF联合或不联合10 μmol/Lc-Jun氨基末端激酶(JNK)抑制剂(SP600125)组,作用48 h,蛋白质印迹法检测MAPK通路相关蛋白JNK、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、细胞外信号调节激酶(ERK)和p38 MAPK表达变化.结果 10、30、50 μg/ml PRF作用24、48、72 h后NB4细胞增殖受到抑制,呈浓度-时间依赖性(均P＜ 0.05),24、48、72 h半数抑制浓度(IC50)分别为(40.03±2.23) μg/ml、(22.92±1.72) μg/ml、(17.99±1.48) μg/ml.激光共聚焦显微镜观察到NB4细胞经PRF处理后呈现明显凋亡特征.10 μmol/L SP600125与不同浓度PRF共培养NB4细胞48 h后,NB4细胞JNK1表达受抑(P＜0.05),JNK2/3、p38 MAPK表达有所下降,但差异均无统计学意义(均P＞ 0.05);ERK1、ERK2在单药组表达逐渐上调,联合用药组则表达递减,TNF-α在50 μg/mlPRF+ SP600125组较50 μg/ml PRF单药组表达下调,10、30μg/ml PRF+ SP600125组则较10、30 μg/mlPRF单药组表达上调.结论 10～50 μg/ml PRF可能通过TNF-α激活MAPK信号途径,JNK、ERK1/2、p38 MAPK三者相互作用、相互影响,激活促凋亡相关蛋白,诱导NB4细胞凋亡.