Notch1信号通路对肺腺癌细胞侵袭和顺铂耐药的影响及其机制

摘要

目的:观察阻断Notch1信号通路对肺腺癌细胞侵袭、血管生成和上皮-间质转化(EMT)及其对顺铂敏感性的影响,阐明Notch1信号通路在肺腺癌侵袭和转移及顺铂耐药中的作用及相关机制.方法:以γ-分泌酶抑制剂(DAPT)作为Notch1信号通路阻断剂作用A549细胞,分为0μmol·L-1 DAPT组(对照组)、10μmol·L-1 DAPT组和20μmol·L-1 DAPT组.采用Transwell小室实验检测各组A549细胞中侵袭细胞数,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测各组细胞培养上清液中基质金属蛋白酶9(MMP-9)和血管内皮生长因子(VEGF)水平,Western blotting法检测各组A549细胞中Notch1、Hes1、波形蛋白(Vimentin)、N钙黏附蛋白(N-cadherin)和E钙黏附蛋白(E-cadherin)蛋白表达水平,CCK-8法检测顺铂(0.625～5.000 mg·L-1)作用各组A549细胞的生长抑制率,Western blotting法检测0和1.250 mg·L-1顺铂单独作用A549细胞后Notch1和Hes1蛋白表达水平以及其单独和联合10μmol·L-1 DAPT作用A549细胞后P-糖蛋白(P-gp)和多药耐药相关蛋白1(MRP1)蛋白表达水平.结果:与对照组比较,10和20μmol·L-1 DAPT组A549细胞中侵袭细胞数明显减少(P<0.05或P<0.01),细胞培养上清液中MMP-9和VEGF水平明显降低(P<0.05或P<0.01),A549细胞中Notch1、Hes1、Vimentin和N-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01),E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.05).与对照组比较,10和20μmol·L-1 DAPT组A549细胞的生长抑制率明显升高(P<0.05或P<0.01).与0 mg·L-1顺铂组比较,1.250 mg·L-1顺铂组A549细胞中Notch1、Hes1、P-gp和MRP1蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与1.250 mg·L-1顺铂组比较,1.250 mg·L-1顺铂联合10μmol·L-1 DAPT组A549细胞中P-gp和MRP1蛋白表达水平明显降低(P<0.01).结论:阻断Notch1信号通路可抑制肺腺癌细胞的侵袭并降低其对顺铂的耐药作用.