小鼠肌肉内绿色荧光蛋白基因电转染

摘要

目的:将细胞电通透技术应用到DNA肌肉转染并确定达到高效电转染的参数条件.方法:以增强绿色荧光蛋白(EGFP)基因质粒作为报告基因,进行小鼠体内肌肉组织电转染实验,在部分参数固定情况下,某一参数发生变化,通过荧光显微镜观察、公式计算得出转染率,进行比较.确定转染的最佳电场强度、脉冲时值和质粒剂量.结果:EGFP质粒15 μg注射到小鼠的胫前肌,在注入后给予如下参数,即电脉冲200 V·cm-1,20 ms,1 Hz,8次,转染率最高,可达(73.2±7.2)%.EGFP质粒注射后不会在细胞外立即降解,注射质粒DNA 1 h内给予电脉冲不影响转染率;15μg为最适当的DNA剂量;EGFP蛋白的表达,7 d达到高峰.结论:与单纯EGFP质粒肌肉注射相比,DNA肌肉电转染可极大地提高其转染率.