RNA干扰PTEN基因对HCT-8细胞增殖能力的影响

摘要

目的:观察小干扰RNA(siRNA)对结肠癌相关基因PTEN表达的抑制作用及其对结肠癌细胞增殖能力的影响.方法:构建携带有针对PTEN基因序列的siRNA真核绿色荧光表达载体重组质粒pGPU6/GFP/Neo-PTEN-1、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-2、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-3和pGPU6/GFP/Neo-PTEN-4,脂质体法转染入结肠癌HCT-8细胞(分别为p1、p2、p3和p4组),同时设转染阴性对照质粒组(p5组)和亲本细胞组(p6组),实时 PCR方法检测PTEN mRNA表达,MTT法分析细胞增殖活性变化.结果:通过荧光显微镜观察计数,细胞转染率为58%.实时 PCR方法检测结果显示,siRNA 重组质粒pGPU6/GFP/Neo-PTEN-1、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-2、pGPU6/GFP/Neo-PTEN-3和pGPU6/GFP/Neo-PTEN-4的抑制率分别为48.3%、76.5%、29.4%和61.2%,与p6组比较差异均有统计学意义(P<0.05).MTT结果表明,细胞增殖抑制能力明显增强.结论:PTEN基因在肿瘤的发生发展中可能起到一定的作用.